10 e J ournée s cientifique
mardi, 6 juin 2017 Auditorium et Jardin des 4 saisons CRCHU Ste-‐Justine
CAHIER DES ABRÉGÉS
e
10 Journée scientifique du GRUM Mardi, 6 juin 2017 Centre de recherche du CHU Sainte-Justine Jardin 4 saisons, Bloc 11 – Niveau A 3175 Chemin de la Côte-Sainte-Catherine
Programme 8:00 à 8:55
Accueil et installation des affiches
8:55 à 9:00
Mot de bienvenue Gerardo Ferbeyre, co-directeur, GRUM
9:00 à 10:00
Présentations orales étudiantes – séance I
10:00 à 10:15
Pause
10:15 à 11:30
Présentations orales étudiantes – séance II
11:30 à 13:00
Lunch et Séance d’affiches – I (évaluation affiches 1 à 20)
13:00 à 15:45
Conférences : Développement de thérapies innovantes issues du monde académique
13:00 à 13:50
L’entrepreneuriat biopharmaceutique : conditions gagnantes Jean-Paul Castaigne, MD, MBA, Président et Chef de la direction de Rytvel Biotech (Montréal)
13:50 à 14:40
Epigenetic Therapy as a Primer for Cancer Immunotherapy Daniel De Carvalho, PhD, Canada Research Chair in Cancer Epigenetics and Epigenetic Therapy, Helen M Cooke Associate Professor in Cancer Epigenetics Scientist, Princess Margaret Cancer Centre, Dept. of Medical Biophysics, University of Toronto
14:40 à 14:55
Pause
14:55 à 15:45
Novel Chemical Modulators for Oncolytic Virotherapy Jean-Simon Diallo, PhD, Scientist, Centre for Innovative Cancer Research, Ottawa Hospital Research Institute ; Assistant Professor, Department of Biochemistry, Microbiology, and Immunology, University of Ottawa
15:45 à 16:50
Séance d’affiches II (évaluation affiches 21 à 34) et cocktail de réseautage
16:50 à 17:00
Remise des prix d’excellence, Mot de la fin Denis deBlois, co-directeur, GRUM Infos : (514) 343-6111 #3624
[email protected]
10e Journée scientifique
8:55-‐9:00 Mot de bienvenue, (Auditorium) Gerardo Ferbeyre, Co-‐directeur GRUM
Mardi, 6 juin 2017 CRCHU Ste-‐Justine
PRÉSENTATIONS ORALES (Auditorium) 9:00-‐9:15
Étudiant PhD Rachid Abaji
Directeur M. Krajinovic
9:15-‐9:30 PD Henry Aceros N. Noiseux/S. Der Sarkissian 9:30-‐9:45 Stag. Alexandra Beaudry-‐Richar S. Chemtob 9:45-‐10:00 PhD Pierre-‐Luc Latreille 10:00-‐10:15 Pause (Jardins 4 saisons)
P. Hildgen/X. Banquy
10:15-‐10:30 10:30 -‐10:45 10:45-‐11:00 11:00-‐11:15 11:15-‐11:30
G. Ferbeyre G. Pineyro W. Lubell/D. Chatenet AR. Schmitzer V.-‐G. Roullin/K. Plamen
PhD Marie-‐Camille Rowell PhD Ahmed Mansour PhD Antoine Douchez PhD Audrey Hébert PhD Cloé Esposito (PD=stagiaire postdoctoral)
Titre Identification des marqueurs génétiques associés aux complications liées à l'administration d'asparaginase chez les enfants leucémiques à partir de données de séquençage d'exome entier Identification d'un nouvel agent pharmacologique avec des effets cardioprotecteurs dans l'infarctus de myocarde A Novel Peptide Blocks the Inflammation Mediated by Interleukin-‐1 in Preterm Birth and Prevents Damages in the Eyes of the Pups L'impact des propriétés mécaniques sur la diffusion de nanovecteurs dans des gels par microscopie différentielle dynamique Pharmacological Inhibition of NAMPT Sensitives Pancreatic Cancer Cells to the Antineoplastic Effects of Metformin Distinct Mechanisms of DOR Agonist-‐Induced AC Superactivation Synthesis and Evaluation of Benzotriazepinone Turn Mimics as Allosteric Modulators of the Urotensin II Receptor Anticancer and Antibacterial Properties of Alkyl Biguanides and Investigation of Their Cellular Mode of Action Développement de nanohydrogels comme système de délivrance de vaccins pour application vétérinaire
11:30 -‐13:00 LUNCH et SESSION AFFICHES ÉTUDIANTES (Jardins 4 saisons) 1 2 3
Étudiant MSc Rabeb Mouna Derbali Stag. Anne-‐Sophie Racine PhD Amir Medjtoh
Directeur J. Leblond-‐Chain L-‐E Trudeau M. Bouvier/S. Laporte
4 5 6
PhD Marine Diennet Stag. Gabrielle McInnes PhD Rahma Boulahya
S. Mader N. Raynal M. Lordkipanidzé/Y. Mehri
7 8 9 10 11 12
PhD PhD MSc Stag MSc PhD
E. Thorin P. Hildgen/X. Banquy G. Roullin/G. Leclair JF Gauchat X. Banquy/J-‐M Rabanel M. Krajinovic
13 14
Stag Margault Sarrazin PhD Iness Charfi
V.-‐G. Roullin G. Pineyro
15
MSc Wided Akik
G. Leclair/M. Servant
16
MSc Céline Thibault
J. Autmizguine/C. Litalien
Titre Amélioration de l’encapsulation spécifique et de la libération contrôlée en utilisant des liposomes à bases d’aptamères Caractérisation de l'arborisation axonale des neurones dopaminergiques du bulbe olfactif Characterization of Variants in the Coding Sequence of the Human Melanocortin 4 Receptor Found in Obese Cohort From Quebec Population Combination Therapies in ER+ Breast Cancer Treatment Comparaison de l’efficacité anticancéreuse de deux glycosides cardiotoniques Investigation des mécanismes physiologiques menant à la relâche du BDNF par les plaquettes et leur susceptibilité aux médicaments antiplaquettaires Contribution de l’Angiopoietine-‐like 2 dans la sénescence endothéliale associée à l’athérosclérose Copolymer Composition Influences Nanoparticle Properties and Subsequent Drug Penetration into Intact and,Impaired Skin Designing a New Validated In Vitro BBB Model Effet de la Cardiotrophin-‐Like Cytokine (CLCF1) sur la polarisation des macrophages Effet de la méthode de fabrication sur les propriétés physico-‐chimiques des nanoparticules à base de PLA-‐PEG Étude des facteurs génétiques dans les complications du traitement à longterme neurocognitives et de qualité de vie chez les survivants de la leucémie lymphoblastique aigüe de l'enfant Développement d’organogels se formant in situ pour application thérapeutique vétérinaire. Étude de l'effet de la déstabilisation du complexe récepteur delta-‐opiacé (DOR)-‐ protéine Gβγ-‐βARRESTINE2sur le trafic du récepteur Étude de la perméabilité intestinale des médicaments par la reconstitution du transporteur ABCG2/BCRP dans des protéoliposomes Étude pharmacocinétique de population du linezolide chez les nourrissons prématurés
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PhD Rony Chidiac
JP Gratton
Étude protéomique de l'implication de la voie P38 MAPK dans la régulation de ZO-‐1aux jonctions des cellules endothéliales
Laurie Caland Augustine Lalloz Ina Puscas Véronique Laplante Teresita Rode García Kateryna Petrykey
18 19
Stag Cyrielle Rakotovao PhD Véronique Martin-‐Bouyer
X. Banquy/A. Lalloz F. Varin/P. Drolet
Évaluation de la stabilité d’actifs sensibles encapsulés dans des nanoparticules polymériques Évaluation pharmacodynamique du comportement sensitif et mesures pharmacocinétiques d'un anesthésique local, la ropivacaïne, lors d'injection périneurale du nerf sciatique chez le lapin réveillé.
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PD
D. Sinnett
Identification of Novel Therapeutic Targets by Functional Genomic Characterization of Childhood Acute Lymphoblastic Leukemia
Haytham Khoury
CONFÉRENCIERS INVITÉS (Auditorium) 13:00-‐13:50 L’entrepreneuriat biopharmaceutique : conditions gagnantes Jean-‐Paul Castaigne, MD, MBA, Président et Chef de la direction de Rytvel Biotech (Montréal) 13:50-‐14:40 Epigenetic Therapy as a Primer for Cancer Immunotherapy Daniel De Carvalho, PhD, Canada Research Chair in Cancer Epigenetics and Epigenetic Therapy Pause (Jardins 4 saisons) 14:40-‐14:55 14:55-‐15:45 Novel Chemical Modulators for Oncolytic Virotherapy Jean-‐Simon Diallo, PhD, Scientist, Centre for Innovative Cancer Research, Ottawa 15:45 -‐16:50 COCKTAIL et SESSION AFFICHES ÉTUDIANTES (Jardins 4 saisons) 21
Étudiant Stag Audrey Béliveau
Directeur M. Lordkipanidzé
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Stag MSc MSc Stag PhD Stag
X. Banquy JF Gauchat M. Servant J. Leblond-‐Chain R. Couture D. Sinett
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PD Maxime Parisotto PhD Besma Benredjem MSc Vanessa Discepola
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PhD Elodie Da Costa
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MSc Vanda Gaonac'h-‐Lovejoy PhD Jimmy Faivre MSc Amarilys Boudreault
Arnould Tiberghien Sarah Nahlé Nesrine Fazez Giorgia Frei Youssef Haddad Maxime Hovington
Titre Optimisation des techniques de Western Blot afin de permettre la détection et l’identification de la neurotrophine BDNF dans les plaquettes humaines
Impact du couvrement de surfaces des nanoparticules sur la stabilité colloïdale en milieux biologiques simulés L’interaction de la cytokine composite CLCF1/CRLF1 avec le cholestérol la rend-‐elle sensible aux statines ? La voie de signalisation IKKβ/IRF5 comme cible thérapeutique et biomarqueur potentiel pour la sclérodermie systémique Comparaison des liposomes et des nanoparticules pour l'administration pulmonaire de la lévofloxacine Le récepteur B1 des kinines dans le système vasculaire du rat diabétique Médecine de précision en oncologie pédiatrique : caractérisation d’une nouvelle mutation du gène DNMT3A dans la tumeur de Wilms AR Schmitzer Pharmacological Inhibition of NAMPT Sensitizes Pancreatic Cancer Cells to the Antineoplastic Effects of Metformin G. Pineyro Prédiction des effets secondaires in vivo des analgésiques opioides via l’analyse de leurs profils signalétiques in vitro M. Lordkipanidzé/G. Rousseau Prevalence and Clinical Impact of Thrombocytopenia in Patients With Acute Coronary Syndromes: A Systematic Review and Meta-‐Analysis N. Raynal Repositionner les Glycosides Cardiotoniques Pour Reprogrammer les Super-‐Enhancers Dans les Cancers Dépendants de C-‐ MYC JP Gratton Rôle de Rap1 dans la stabilisation de la barrière endothéliale et l’angiogenèse stimulées par l’angiopoïétine-‐1 X. Banquy Towards the Fabrication of a Bioinspired Synovial Fluid for Viscosupplementation Treatment in Osteoarthritis S. Chemtob Un potentiel peptide antagoniste du neuromédine U Récepteur 2 (NmU-‐R2) pour prévenir le travail préterme
16:50-‐17:00 Remise des prix d'excellence
Mot de la fin Denis deBlois, co-‐directeur -‐ GRUM
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10e Journée scientifique Présentations orales
9h00 - IDENTIFICATION DES MARQUEURS GÉNÉTIQUES ASSOCIÉS AUX COMPLICATIONS LIÉES À L’ADMINISTRATION D’ASPARAGINASE CHEZ LES ENFANTS LEUCÉMIQUES À PARTIR DE DONNÉES DE SÉQUENÇAGE D’EXOME ENTIER Rachid ABAJI1,2,3, Vincent Gagné3, Chang Jiang Xu3, Jean-François Spinella3, Francesco Ceppi3, Caroline Laverdière1,3, Jean-Marie Leclerc1,3, Daniel Sinnett1,3, Maja Krajinovic1,2,3 1
Université de Montréal, 2Médecine, Pharmacologie, Université de Montréal, 3CHU SteJustine Le traitement intensif pédiatrique de la leucémie lymphoblastique aiguë (LLA) est associé à des effets secondaires à court terme et des conséquences importantes à long terme. L'allergie, la pancréatite et la thrombose se sont des complications courantes du traitement de l'asparaginase (ASNase), qui est un composant clé dans la plupart des protocoles de traitement contre LLA. La caractérisation de variantes génétiques influençant la variabilité observée entre les patients par rapport au développement de ces complications permettrait au traitement guidé par le génotypage de maximiser l'efficacité et de minimiser la toxicité. En partant des variantes prédites fonctionnelles, obtenues à partir des données de séquençage de l'exome entier (WES) de la cohorte pédiatrique québécoise de la LLA, nous avons effectué des études d'association au niveau de l'exome qui mettaient en évidence l`influence de la pharmacogénétique sur la toxicité liée à l'administration de l`ASNase. Les variantes les plus significatives ont été confirmées par génotypage et suivi d'une étape de validation dans une cohorte de réplication. Douze SNP ont été associés à des complications liées à l’ASNase dans la cohorte de découverte dont 3 avec allergie, 3 avec pancréatite et 6 avec thrombose. De plus, l'analyse multivariée suggère des interactions synergiques entre les SNP identifiés pour chacune des toxicités étudiées. Surtout, MYBBP1A était associé avec allergie (p=0.0006), pancréatite (p=0,002), thrombose (p=0,02), survie sans événement (p=0,02) et survie (p=0,003). De plus, l'association des SNP dans les gènes MYBBP1A, IL16 et SPEF2 avec pancréatite a été répliquée dans la cohorte de validation (p≤0,05). Ce travail démontre que l'utilisation des données de WES est une stratégie efficace «sans hypothèse» pour l'identification de marqueurs génétiques significatifs modulant l'effet du traitement dans la LLA de l'enfance. En effet, il met l`emphase sur l`interaction entre ces marqueurs qui peuvent expliquer la variabilité observée dans la prédisposition des patients aux toxicités induites par l'ASNase.
1
9h15 - Identification d’un nouvel agent pharmacologique avec des effets cardioprotecteurs dans l’infarctus de myocarde. Henry Aceros1,4, Shant Der Sarkissian2,4, Mélanie Borie1, Louis-Mathieu Stevens3, Samer Mansour3, Nicolas Noiseux1 1
CRCHUM, Université de Montréal, 2CRCHUM / UdeM, 3Université de Montréal, 4 Premiers auteurs équivalents Lors d’un infarctus de myocarde (IM), les guides cliniques exigent la réperfusion immédiate. La restauration du flux coronarien induit des lésions supplémentaires. On a été les premiers à montrer que le Celastrol, un composé naturel qui cible le HSP90, réduit la taille de la lésion ischémique et maintient la fonction myocardique dans un modèle animal de l’IM chronique, et sur la lésion myocardique par ischémie/réperfusion (I/R). En se basant sur ces résultats, on a étendu notre recherche pour trouver des nouvelles molécules cardioprotectrices en utilisant notre plateforme de découverte et développement de médicaments. Méthodes : Notre plateforme inclut des tests in vitro, ex vivo et in vivo. Des cardiomoyblastes H9c2 sont défiés avec des stress hypoxiques ( 80). Résultats : Vingt-six nourrissons ont reçu du linezolid intraveineux à raison de 10 mg/kg aux 8 à 12 heures. Les médianes de l’âge et du poids était de 24 jours (8, 88) et de 1.42 kg (0.81, 3.26), respectivement. Un total de 78 mesures de concentrations plasmatiques ont été récoltées, avec une médiane de 3 (1, 7) prélèvements par patient. Un modèle monocompartimental décrivait les données de façon adéquate. En plus du poids, le modèle final incluait l’âge pour la CL. Tous les patients ont atteint la cible PD, considérant une CMI de 1 mg/L. Aucune thrombocytopénie en lien avec le linezolide n’a été observée. Conclusion : Chez les nourrissons prématurés, la clairance du linezolide était plus basse et le volume de distribution était dans les limites supérieures des valeurs précédemment décrites en pédiatrie. Les régimes posologiques utilisés étaient efficaces et bien tolérés.
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17 - ÉTUDE PROTÉOMIQUE DE L’IMPLICATION DE LA VOIE P38 MAPK DANS LA RÉGULATION DE ZO-1 AUX JONCTIONS DES CELLULES ENDOTHÉLIALES Rony Chidiac1, Jean-Philippe Gratton1 1
Université de Montréal
ZO-1 est une protéine essentielle pour la formation et le maintien des jonctions intercellulaires. Précédemment, une analyse par spectrométrie de masse du phosphoprotéome de cellules endothéliales (CE) stimulées avec le facteur de croissance de l’endothélium vasculaire (VEGF) nous a permis de révéler un lien entre la prolifération et les niveaux d’expression cellulaire de ZO-1. Nous avons trouvé que la diminution de l’expression de ZO-1 augmente la prolifération des CE et ceci dépend de son action aux jonctions intercellulaires. Par ailleurs, nous avons trouvé que l’inhibiteur de la voie de signalisation p38 MAPK (mitogen activated-protein kinase), le SB203580, empêche la prolifération induite par une diminution de l’expression de ZO-1. Il est connu que l’association de ZO-1 à diverses protéines intracellulaires détermine ses fonctions cellulaires. Afin d’investiguer la contribution de la voie p38 MAPK sur la régulation de la fonction de ZO-1 par le VEGF, nous avons examiné la composition du complexe protéique de ZO-1 par spectrométrie de masse dans des CE traitées ou non avec le VEGF et le SB203580. Pour ce faire, nous avons isolé ZO-1 de lysats de CE par immunoprécipitation et les protéines associées à ZO-1 ont été identifiées par spectrométrie de masse. Nos résultats montrent que la stimulation des CE avec le VEGF affecte l’association de ZO-1 avec des protéines impliquées dans la régulation du cytosquelette et les modifications post-transcriptionnelles. Par contre, les interacteurs de ZO-1 qui sont influencées par le VEGF et dépendant de la voie p38 MAPK jouent principalement un rôle dans les modifications post-transcriptionnelles. Cette étude devrait nous permettre de mieux comprendre l’effet de la voie p38 MAPK sur la fonction de ZO-1 au niveau des jonctions intercellulaires et son rôle dans la prolifération des CE et l’angiogenèse.
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18 - Évaluation de la stabilité d’actifs sensibles encapsulés dans des nanoparticules polymériques Cyrielle Rakotovao1,3, Augustine LALLOZ2,3,4,5, Araceli Garcia3, Jean-Michel Rabanel6, Patrice Hildgen4, Xavier Banquy3 1
Université de Montréal, 2Université de Montréal, 3Laboratoire de biomatériaux et interfaces structurées, Faculté de pharmacie, Université de Montréal, 4Laboratoire de Nanotechnologie Pharmaceutique, Faculté de pharmacie, Université de Montréal, 5 Laboratoire d'Automatique et de Génie des Procédés, Université Claude Bernard Lyon 1, 6Université de Montréal En permettant l’encapsulation des actifs pharmaceutiques, l’utilisation de nanovecteurs a montré son intérêt pour résoudre les problèmes de stabilité liés à la dégradation des actifs. Néanmoins, à ce jour peu d’études se sont intéressées à l’influence des propriétés physicochimiques des nanoparticules sur la stabilité des actifs encapsulés. A travers l’encapsulation de deux actifs pharmaceutiques sensibles, le cholécalciférol et le curcumin, notre but est de déterminer l’influence de 1) la composition chimique des NP et 2) des propriétés structurelles des NP sur la stabilité des actifs. Une librairie de polymères amphiphile à base d’acide poly(lactique)-poly(ethylène glycol) (PLA-b-PEG) a été synthétisée par copolymérisation par ouverture de cycle. La longueur du bloc PEG a été variée (pas de PEG, 1, 2, 5 et 10kDa) pour obtenir des polymères d’hydrophilie variable. Des nanoparticules polymériques chargées en cholecalciférol ou en curcumin (7% w/wpolymère) ont ensuite été préparées à partir de ces polymères par le procédé de nanoprécipitation flash. La taille, le potentiel Zêta, et l’efficacité d’encapsulation ont été déterminés en fonction de la composition chimique du polymère, du débit de fabrication et de l’actif choisi. La taille des nanoparticules chargées dépend à la fois de la composition chimique du polymère, du débit d’injection utilisé lors de la fabrication et de l’actif encapsulé. Le potentiel Zêta varie également avec le contenu en PEG dans le polymère (de -57,3 à 5,53 mV) mais ne dépend pas de l’actif encapsulé ni du débit de fabrication, sauf pour les NP de PLA. L’efficacité d’encapsulation, quant à elle, sembsemble indépendante des polymères utilisés mais varie selon la solubilité de l’actif (85% pour le cholécalciférol, 3550% pour le curcumin) et les débits élevés ont tendances à diminuer l’efficacité d’encapsulation.
Les propriétés physico-chimiques des NP sont influencés à la fois par le polymère, le procédé de fabrication et l’actif encapsulé. La stabilité des actifs dans les nanoparticules de composition chimique différentes et de tailles différentes sera par la suite évaluée afin de déterminer si la structure des NP contrôle leur dégradation.
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19 - Évaluation pharmacodynamique du comportement sensitif et mesures pharmacocinétiques d'un anesthésique local, la ropivacaïne, lors d'injection périneurale du nerf sciatique chez le lapin réveillé. V. Martin-Bouyer1, P. Drolet2, F. Varin1 1
Faculté de pharmacie, 2Faculté de médecine, département d'anesthésiologie
Problématique : La ropivacaïne (ROP) est un anesthésique local (AL) utilisé lors d’interventions chirurgicales orthopédiques. Une étude chez des patients et des animaux vise à développer un modèle pharmacocinétique-pharmacodynamique (PK-PD) et décrire la relation entre concentration plasmatique de ROP et perception sensorielle après injection périneurale. Objectif : étudier les effets PD et les concentrations plasmatiques de la ROP lors du bloc sciatique (SCI) chez le lapin réveillé. Méthode : Sept lapins mâles croisés Nouvelle Zélande ont été conditionnés aux neurostimulations. Les réponses de mouvement de la tête (HLR) et d’échappement du membre postérieur stimulé (EMR) ont été mises en évidence. Après le bloc SCI de ROP (2 ou 3 mg/kg), des neurostimulations et des prélèvements sanguins ont été réalisés. Les concentrations de ROP ont été déterminées par chromatographie en phase liquide à haute performance. Différents paramètres PK ont été calculés par analyse non compartimentale. Résultats et discussion : Les temps à la concentration maximale (26 ± 15 min) et de mise en place du bloc SCI de ROP (53 ± 47 min) sont très courts. Le temps de demi-vie de la ROP après le bloc SCI est 189 ± 50 min. Le temps de récupération de 75% est 308 ± 89 min et l’index de récupération est 57 ± 37 min. Le volume de distribution est grand (13 ± 5 L/kg), cet AL étant liposoluble. La clairance est 48 ± 11 mL/min/kg. La ROP est biotransformée par les CYP1A2. Perspectives: La relation PK/PD de la ROP lors du bloc SCI reste à être définie chez le lapin. Les résultats obtenus permettront de valider le modèle proposé chez les patients lors du bloc fémoral (FEM) et de tester de nouveaux ALs ou régimes posologiques chez l’animal.
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20 - Identification of novel therapeutic targets by functional genomic characterization of childhood acute lymphoblastic leukemia Haytham Khoury1, Jean-François Spinella1,2, Nicolas Garnier1, Pauline Cassart1, Chantal Richer1, Maxime Caron1, Pascal St-Onge1, Jasmine Healy1, Daniel Sinnett1,2,3 1
CHU Sainte-Justine, 2Université de Montréal, 3Departement of Pediatrics, University of Montreal, Montreal, Canada Childhood acute lymphoblastic leukemia (cALL) is the most frequent pediatric cancer (25% of all pediatric tumors). Nearly 20% of patients do not respond to current treatments, making this disease the leading cause of cancer-related mortality in children. To identify tumor-specific mutations driving cALL and designing new treatment for this disease, we performed whole exome sequencing (WES) from 200 cALL patients. Then, we performed shRNA lentiviral pool screen for the genes with the highest validation score by WES. Top 10 driver gene candidates, found by the screen, are being validated and analyzed. By WES, we identified 206 non-synonymous mutations (194 point mutations, 3 indels, 7 splicing mutations), of which 132 analyzed by the shRNA screen. Of the latter, 46 appeared to be potentially oncogenic and found to be implicated in 11 main biological processes. The top 10 potential oncogenes identified are EIF3B, TRRAP, FLT3, TUBGCP2, PAX5, KDM2A, SNCAIP, RPLP0, U2AF1 and WHSC1. When we searched our patient database to identify their mutational profile, we found that these genes harbor 15 different mutations, of which 13 were missense, 1 in-frame indel and 1 splicing, consistent with their potential oncogenic role. Furthermore, we analyzed whether these proteins are druggable. Crystallography data are available for 4 genes (EIF3B, FLT3, RPLP0 and WHSC1). The number of druggable pockets in the latter proteins were 23, 6, 12, 12, with pocket druggability scores reaching 0.93, 0.98, 0.76 and 0.78, respectively. We started functional and pharmacological analysis of 2 of the top 10 potential oncogenes, WHSC1 and TRRAP. WHSC1 is a H3K36me2 methyltransferase. TRRAP is an adapter protein found in various complexes with histone acetyltransferase(HAT) activity. Structural analysis of the wild-type and muted TRRAP revealed major differences in the 3D structure, suggesting that the mutation may cause significant change in the protein function. Pharmacological inhibition of WHSC1 induced significant toxicity in 4 Pre-B ALL cell lines. These initial results indicate that our approach of functional genomic characterization has the potential to identify driver mutations in cALL and to considerably accelerate the discovery of new targeted therapy for this disease.
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21 - Optimisation des techniques de Western Blot afin de permettre la détection et l’identification de la neurotrophine BDNF dans les plaquettes humaines Audrey Béliveau1,2,3, Rahma Boulahya1,2,4, Yahye Merhi1,2,4, Marie Lordkipanidzé1,2,3 1 4
Institut de Cardiologie de Montréal, 2Université de Montréal, 3Faculté de Pharmacie, Faculté de Médecine
Introduction: Le Brain-Derived Neurotrophic Factor (BDNF) est une molécule présente dans le cerveau appartenant à la famille des neurotrophines. Cette protéine serait d’abord synthétisée en ProBDNF (32kDa) puis clivée en BDNF mature (14kDa). Dans la littérature, des études récentes ont répertorié 11 exons et 9 promoteurs rendant différentes transcriptions possibles pour la protéine. Ces transcrits auraient un niveau d’expression plus ou moins élevé selon différents tissus et permettent la formation de 5 isoformes de BDNF variant entre 27 et 37kDa. Au cours des dernières années, des études ont permis de découvrir que les plaquettes seraient le plus grand réservoir de BDNF au niveau périphérique. Étant donné que le processus d’emmagasinage du BDNF dans les plaquettes est encore mal élucidé, peu de données sont disponibles sur le ProBDNF et sa transformation en BDNF mature au niveau périphérique. Aussi, peu de documentation est disponible sur l’isoforme prédominante de BDNF dans les plaquettes et donc sur les différents poids moléculaires qu’il serait possible de retrouver dans ces cellules pour cette protéine. Cette étude vise à confirmer la présence de BDNF et d’investiguer la présence de ProBDNF au sein de plaquettes humaines. Méthodes: Les plaquettes ont été isolées à partir de sang obtenu de volontaires sains et ont été préparées à une concentration de 250x106/mL par échantillon. Les analyses protéiques ont été effectuées par la technique d‘électrophorèse sur gels d’acrylamide. Des protéines recombinantes de BDNF et proBDNF, ainsi que des cellules mononuclées de sang périphérique, ont été utilisées comme contrôles positifs. Résultats: Des bandes apparaissent à la hauteur de 50 et 14kDa lors de l’utilisation de l’anticorps reconnaissant la partie mature du BDNF et à la hauteur de 50kDa lors de l’utilisation de l’anticorps reconnaissant le proBDNF. L’intensité des bandes correspondant au BDNF et proBDNF varient considérablement entre les différents échantillons malgré une normalisation avec une protéine de maintenance (ß-actine). Discussion: La présence de bandes à 14kDa permet de confirmer la présence de BDNF dans les plaquettes de volontaires sains. Les bandes présentes aux alentours 50kDa pourraient correspondre à des dimères de ProBDNF ou du BDNF tronqué.
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22 - Impact du couvrement de surfaces des nanoparticules sur la stabilité colloïdale en milieux biologiques simulés Arnould Tiberghien1,2,5, Pierre-Luc Latreille1,2, Vincent A. Martinez3, Xavier Banquy1,2, Patrice Hildgen1,4 1
Université de Montréal, 2Chaire de recherche du Canada en biomatériaux inspirés du vivant, 3University of Edinburgh, School of Physics and Astronomy, 4Laboratoire de nanotechnologie pharmaceutique, 5Université de Genève L’administration de nanoparticules (NPs) in vivo requiert le plus souvent la voie intraveineuse. Pour cela, il est nécessaire de comprendre les phénomènes ayant lieu à l’interface des NPs pour le développement de nouveaux nanomatériaux. Une couche protéique autour de la NP se formera dû à une interaction protéine-NP. L’albumine est la protéine majoritaire dans le fluide biologique et entraine de nombreuses interactions. Ces interactions vont nuire à la stabilité de la particule et au rôle des groupements fonctionnels présents à sa surface. Dans cette étude nous comparerons l’efficacité des techniques de spectroscopie à corrélation de photon (SCP) à la microscopie différentielle dynamique (DDM) pour l’observation des phénomènes d’agrégation et d’adsorption des protéines aux particules. Des NPs avec des propriétés de surfaces différentes sont fabriquées par le procédé de nanoprécipitation flash. Les NPs sont formés à partir d’un polymère à base d’acide polylactique (PLA) fonctionnalisé pour des particules : chargées positivement (PLADMAEMA), neutres (PLA-PEG et PLA-GAMA), des particules zwitterioniques (PLAPMPC) et des particules non fonctionnalisées de PLA. La stabilité des NPs est évaluée dans différents milieux : dans l’eau à pH 7.4, dans des solutions salines (NaCl), dans des solutions d’albumine (BSA) et du sérum (FBS) afin de simuler les conditions physiologiques. La taille est caractérisée par les deux techniques et le potentiel zêta des NPs est évalué par SCP. On constate des différences de tailles importantes entre la DLS et la DDM en présence de BSA car le le signal de l’albumine est moins visible en DDM et permet de mieux évaluer les NPs qu’avec la DLS. Les particules positives (PLA-DMAEMA) et le sucre (PLA-GAMA) s’agrègent en présence de NaCl à pH 7.4 alors que les particules possédant une charge de surfaces neutre et hydrophile sont plus stables. La BSA montre des effets de stabilisation des particules en présence de NaCl, mais les particules chargées positivement se revêtent d’une large couche de protéine dû à une plus forte adsorption de BSA. La DLS et la DDM met en évidence l’impact de l’effet de surface des NPs sur leur stabilité dans le fluide biologique, l’utilisation d’un fluorophore serait intéressant afin de réduire le signal de la BSA.
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24 - La voie de signalisation IKKβ/IRF5 comme cible thérapeutique et biomarqueur potentiel pour la sclérodermie systémique Nesrine Fazez1, Priscilla Doyon1, Murray Baron2, Marc Servant1 1
Université de Montréal, 2Université McGill
La sclérodermie systémique (SSc) est une maladie auto-immune rare affectant majoritairement le tissu conjonctif. Elle est caractérisée par un dysfonctionnement du système immunitaire, une production excessive de collagène par les fibroblastes causant la fibrose ainsi que diverses vasculopathies conduisant à une diminution de l’espérance de vie. Au niveau moléculaire, une signature interféron (IFN) de type I ainsi que des auto-anticorps (AA) dirigés contre des éléments de la chromatine sont retrouvés dans les tissus et plasma respectivement. Cette signature suggère que l’ADN des patients servirait d’adjuvant dans le déclenchement d’une réponse immunologique. Dans ce contexte, nous proposons que la présence de ces AA est secondaire à une réponse inflammatoire chronique et émettons ainsi l’hypothèse que l’ADN cytosolique agirait à titre de signal de danger lequel démarrerait une boucle « inflammatoire-réparation » chronique conduisant à la fibrose tissulaire. Le but général de notre étude vise donc à comparer l’expression et l’état d’activation des mécanismes moléculaires sous-jacents à la détection de l’ADN et les voies de signalisation menant à la production d’IFN de type I et de cytokines proinflammatoires. Le facteur de transcription inflammatoire Interferon Regulatory Factor-5 (IRF5), dont plusieurs polymorphismes génétiques ont été associés à la sévérité de la maladie, ainsi que de la protéine kinase inflammatoire « Inhibitor of nuclear factor kappa-B kinase » bêta (IKKβ), ayant été identifiée comme étant la kinase activatrice d’IRF5, sont particulièrement intéressants puisqu’ils pourraient expliquer les bases moléculaires de la maladie. Des mesures biochimiques sur des monocytes humains exposés à de l’ADN démontrent effectivement une activation d’IRF5, lequel est également plus exprimé dans des fibroblastes isolés à partir de biopsies cutanées de patients. La découverte d’un biomarqueur plus optimal, par une meilleure compréhension des mécanismes moléculaires, pourrait combler un besoin important en clinique, augmenter les chances de survie des patients et fournir un outil robuste pour le développement de thérapie future.
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25 - Comparaison des liposomes et des nanoparticules pour l'administration pulmonaire de la lévofloxacine Giorgia Frei1, Rabeb Mouna Derbali1, Soudeh Fakhari Tehrani1, Valery Aoun1, Juliana Campos del’Orto1, V. Gaëlle Roullin1, Jeanne Leblond1 1
facult/ de pharmacie UdeM, 2Faculté de pharmacie Udem
L’objectif de l’étude est d’étudier l’encapsulation d’un antibiotique modèle, la lévofloxacine, dans deux types de vecteurs colloïdaux et de comparer les deux systèmes pour l’administration pulmonaire. Des liposomes DSPC/Cholésterol/DSPE-PEG2000: 55/40/5 en mol% et des nanoparticules polymériques biodégradables comme du poly (lactide)(PLA) greffé avec une poly(éthylène glycol)(PEG) ont été préparés et leur capacité à franchir la barrière de mucus, leur interaction dans les bactéries et leur toxicité sur les cellules épithéliales du poumon ont été comparées. La préparation des liposomes a été effectuée par la Méthode de Bangham. Les nanoparticules polymériques ont été synthétisées par homogénisation haute pression, le solvant a ensuite été évaporé, puis la solution a été dialysée pour enlever la drogue non encapsulée puis les nanoparticules ont été lyophilisées. La taille, le potentiel zêta des vecteurs collïdaux ont été évaluées par diffusion dynamique de la lumière (DLS). L’efficacité d’encapsulation (%EE , %DLE) et le cinétique de libération de la levofloxacine dans les vecteurs a été déterminée par HPLCUV. La diffusion à travers le mucus a été évaluée par un test de Transwell® avec du mucus artificiel. L’efficacité antimicrobienne de la lévofloxacine libre ou encapsulée a été testeé sur 5 souches Pseudomonas aeruginosa sensibles ou résistantes. L’efficacité antimicrobienne n’a pas permis de discriminer les formulations, qui montrent toutes des concentrations minimales inhibitrices (MIC)comparables à la lévofloxacine libre. Les cinétiques de libération ont montré une libération immédiate pour les nanoparticules, alors que les liposomes ont démontré une capacité de libération prolongée (20% sur 24h). Ainsi, nous avons poursuivi les études sur les liposomes seulement. Ils ont démontré leur capacité à traverser la barrière de mucus artificiel (63 ± 3% après 48h) grâce à leur charge proche de la neutralité. Des problèmes de reproductibilité des nanoparticules polymériques (NPs) ont été rencontré pendant l’étude. Les liposomes sont des bons vecteurs pour l’administration pulmonaire étant donné qu’ils arrivent à passer la barrière de mucus, barrière majeure des malades de fibrose kystique.
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26 - LE RÉCEPTEUR B1 DES KININES DANS LE SYSTÈME VASCULAIRE DU RAT DIABÉTIQUE Youssef HADDAD1, Réjean COUTURE2 1
Université de Montréal, 2University of Montreal
Le RB1 des kinines, absent en situation physiologique, est induit dans le diabète par un mécanisme impliquant la voie NF-kB. Il active la NADPH oxydase. Objectifs : 1-mieux comprendre l’implication de la protéine kinase C (PKC et son isoforme) dans l’activation de la NADPH oxydase par le RB1;2-localiser par immunohistochimie le RB1 dans le système vasculaire du rat diabétique;3-déterminer la colocalisation cellulaire du RB1 et de la NADPH oxydase. Modèle : Des rats mâles SD sont rendus diabétiques avec une injection de STZ (65mg/kg) et sacrifiés 14 jrs plus tard. Des anneaux d’aorte sont incubés dans le Krebs et traités avec divers inhibiteurs (30 min, 10 µM) pour bloquer la PKC totale, la PKC β1/2, le NF-kB ou la NADPH oxydase en absence et en présence d'un agoniste du RB1 (20 µM). La production de l’anion superoxyde (O2•−) est mesurée au temps 0, 15, 30, 45 min post-agoniste par la méthode de chimiluminescence à la lucigénine. La localisation cellulaire du RB1 sur l’aorte et l’artère poplitée est étudiée avec des marqueurs des cellules endothéliales (RECA), des macrophages (CD11), des cellules musculaires lisses (SMA) et des isoformes de la NADPH oxydase (NOX1 et NOX2).Résultats : La production basale de l’O2•− augmente significativement dans l'aorte avec l’ajout de l’agoniste du RB1(pic à 30 min) et elle est complètement bloquée par la preincubation avec les différents inhibiteurs. Le RB1 est surexprimé dans les vaisseaux de conductance et de résistance chez le rat STZ. Il est colocalisé avec la NADPH oxydase sur les macrophages, le muscle lisse et moins sur l’endothélium. Son activation entraîne une augmentation de l’O2•− via l’activation de la NADPH oxydase, impliquant la PKC β1/2.Par ce mécanisme pro-oxydant, le RB1 peut contribuer aux atteintes vasculaires dans le diabète
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27 - Médecine de précision en oncologie pédiatrique : caractérisation d’une nouvelle mutation du gène DNMT3A dans la tumeur de Wilms Maxime Hovington1,2, Pauline Cassart2, Sylvie Langlois2, Fida KHATER2, Daniel Sinnett1,2 1
Université de Montréal, 2CHU Sainte-Justine
Introduction : La médecine de précision se définit comme l’utilisation de molécules qui ciblent des voies de signalisation ou mutations précises chez des patients. Dans le cadre d’une étude sur les thérapies ciblées pour les patients aux prises avec des cancers réfractaires ou en rechute (TRICEPS), une mutation ponctuelle du gène DNMT3A a été détectée dans une tumeur rénale (patient 40). L’objectif est de déterminer si cette mutation apporte un avantage sélectif dans un contexte cellulaire face aux traitements classiques et si elle pourrait être ciblée par un nouveau traitement.
Matériel et méthodes : L’exome du matériel normal et tumoral, ainsi que le transcriptome de la tumeur ont été séquencés afin de mettre en évidence des variations génomiques. Des cellules HEK293T et ACHN surexprimant le gène DNMT3A sauvage ou muté (P904L) ont été utilisées pour tester la viabilité cellulaire (CellTiter Glo) en présence de traitements anti-cancéreux traditionnels (vincristine et camptothécine) ou de décitabine, connue pour cibler DNMT3A.
Résultats : Ce patient possède 3 variations génomiques actionnables, affectant les gènes ABL2, DDR2 et DNMT3A, pouvant être ciblées par des traitements personnalisés. L’introduction de la mutation P904L dans les HEK293T n’a pas d’effet sur la viabilité cellulaire. Cependant, les cellules ACHN avec la mutation affichent une résistance à la vincristine (5 et 50 nM, p < 0,05), suggérant un avantage sélectif, et sont aussi plus sensibles à la décitabine (1 µM, p < 0,05).
Discussion et conclusion : En seulement 9 semaines, des variations génomiques actionnables furent identifiées et un rapport avec des recommandations thérapeutiques fut présenté au médecin. Les résultats fonctionnels obtenus semblent montrer que la mutation P904L serait bien conductrice (driver) de la tumeur de Wilms, et que la décitabine pourrait être administrée au patient afin de cibler ces cellules cancéreuses. Des études futures permettront d’élucider le mécanisme d’action oncogénique de DNMT3A dans la tumeur de Wilms.
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28 - Pharmacological inhibition of NAMPT sensitizes pancreatic cancer cells to the antineoplastic effects of metformin Maxime Parisotto1, Marie Camille Rowell1, Sebastian Igelmann1, Véronique Bourdeau1, Andreea Schmitzer1, Gerardo Ferbeyre2 1
Université de Montréal, 2Université de Montréal
The use of the antidiabetic drug metformin has been correlated with a reduced cancer incidence suggesting an unexpected anti-neoplastic activity for this compound. Since metformin treatment is safe and economical, there is considerable interest in exploring its anticancer activity in patients. Pancreatic cancer is one of the most aggressive neoplastic diseases for which there is no treatment significantly increasing patient’s survival. Metformin use was associated with reduced pancreatic cancer incidence or better survival in diabetics. In vitro, metformin decreases cell survival and growth of pancreatic cancer cells. In vivo, metformin decreases growth of human pancreatic cancer cell lines xenografts. However, clinical trials using metformin failed to decrease pancreatic cancer progression in patients, raising important questions about molecular mechanisms that protect tumor cells from the antineoplastic activities of metformin. In cancer cells, the primary site of action of metformin has been shown to be complex I of the electron transport chain in mitochondria. Consistent with the inhibition of complex I, we found that metformin reduces NAD+/NADH ratio in pancreatic cancer cells lines. It has been shown that a reduction of NAD+/NADH ratio resulting from complex I inhibition affects cell growth mostly by decreasing aspartate biosynthesis using NAD+ as cofactor. In agreement, aspartate supplementation or treatment with a-ketobutyrate, a compound known to increase NAD+/NADH ratio, resulted in decreased sensitivity to metformin. NAMPT (Nicotinamide phosphoribosyltransferase) is the rate-limiting enzyme that converts nicotinamide to nicotinamide mononucleotide to enable NAD+ synthesis in the salvage pathway. We found that NAMPT expression is increased by metformin in pancreatic cancer cells lines. The inhibition of NAMPT by the FDA-approved drug FK866 (daporinad) in pancreatic cancer cells lines resulted in increased sensitivity to metformin. Our results suggest that the increase of NAMPT expression may be a mechanism of metformin resistance in pancreatic cancer. Finally, the combined treatment with metformin and FK866 was found to be very potent to suppress pancreatic cancer xenografts in mice, while treatment with metformin or FK866 alone had no effect.
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29 - Prédiction des effets secondaires in vivo des analgésiques opioides via l’analyse de leurs profils signalétiques in vitro Besma Benredjem1,2, Jonathan Gallion3, Dennis Pelletier4, Johanie Charbonneau2, Karim Nagi1,2, Victoria Lukashova1, Stephen Jenkinson4, Yong Ren4, Darren Cawkill4, Christian Le gouill1, Anne Schmidt4, Michel Bouvier1, Olivier LIichtarge3, Graciela Pineyro1,2 1
Université de Montréal, 2CHU Sainte-Justine, 3Baylor College of Medicine, 4Pfizer Inc
Opioid analgesics are the first-line treatment for severe acute pain. However, their use, particularly that of Mu opioid receptor (MOR) agonists, is associated with a multitude of side effects such as constipation, respiratory depression, addiction, etc. It has recently been discovered that GPCRs can activate different signaling pathways depending on the bound ligand. In addition, considerable evidence suggests a relationship between recruitment of β-arrestin and the side effects of MOR agonists. We believe that functional selectivity derived from signaling diversity could help develop MOR agonists whose signaling profile would preferentially promote analgesic actions to the detriment of the side effects. For this purpose, we have quantified, using a bioluminescence resonance energy transfer technique (BRET), the profile of known MOR agonists and of new compounds produced by an industrial collaborator (Pfizer). We then used analytical methods of quantitative pharmacology, to extract a set of parameters that allowed us to describe these signaling profiles and we were further able to establish a correlation between some of these parameters and the frequency of side effects reported by clinicians to the FDA. In particular, a direct correlation was observed between efficiency of β-arrestin recruitment and frequency of faecaloma and respiratory depression reports. Finally, using bioinformatic tools, we stratified the drugs according to the similarities and differences of their complex signaling profiles and we showed that these clusters can be predictive of secondary effects. This study provides a general methodology to infer the in vivo responses of new compounds based on existing information for drugs that are already on the market.
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30 - Prevalence and Clinical Impact of Thrombocytopenia in Patients With Acute Coronary Syndromes: A Systematic Review and Meta-Analysis Vanessa Discepola1,2, Mireille Schnitzer3, E. Marc Jolicoeur1,2, Guy Rousseau2,4, Marie Lordkipanidzé1,3 1
Institut de Cardiologie de Montréal, 2Faculté de Médecine, Université de Montréal, 3 Faculté de Pharmacie, Université de Montréal, 4Centre de Recherche, Hôpital du Sacré-Coeur de Montréal Thrombocytopenia (TP), defined as a drop in platelet count to
